Contenido del Kit:

Componentes	A99-50T	A99-100T
RNase A	1 ml	1 ml × 2
Proteinasa K	1 ml	1 ml × 2
Solución SA	40 ml	80 ml
Solución SB	20 ml	40 ml
Solución SC	30 ml	60 ml
Buffer de lavado	15 ml	15 ml × 2
Buffer de elución	15 ml	30 ml
Columna de filtro	50 Unidades	100 Unidades
Columna de adsorción	50 Unidades	100 Unidades
Tubo de recogida	50 Unidades	100 Unidades
Instruciones	1 Pieza	1 Pieza

Nota: Solución SA, SB, y SC deben almacenarse entre 2 y 8 °C después de abrirse.

La proteinasa K y la RNasa A deben almacenarse a -20 °C.

Descripción:

El kit de aislamiento de ADN genómico de heces MaxExtraction es adecuado para eliminar el ADN microbiano de las heces. En la mayor medida posible, este kit lisa eficazmente varias bacterias y hongos que se encuentran en las heces. El ADN extraído tiene un alto rendimiento y una buena integridad, lo que lo hace adecuado para su uso en una amplia gama de procedimientos habituales, como transferencias Southern, PCR, digestión enzimática y creación de bibliotecas.

Protocolo:

Antes de usar, agregue etanol absoluto recién abierto al tampón de lavado, el volumen debe calcularse usando la etiqueta de la botella como guía. Vuelva a tapar la botella y agítela bien. De 2 a 8°C se realiza todo el proceso de centrifugado.

1. Agregue 400–800 µL de Solución SA a una muestra de heces de 50–200 mg y colóquela en hielo durante 10 minutos. 1 minuto de centrifugado a 12000 rpm.

2. Deseche el sobrenadante. A la precipitación, agregue 400 µL ml de Solución SB, 20 µL de RNasa A (10 mg/ml) y 20 ml de Proteinasa K (10 mg/ml), y agite durante 30 segundos. Incube durante 30 a 60 minutos en un baño de agua a 65°C. Invierta el tubo varias veces durante la incubación,. Centrifugar a 12.000 rpm durante 2 minutos.

3. Agregue 300-600 µL de Solución SC al sobrenadante en un tubo de centrífuga de 1,5 ml. Centrifugar durante 1-2 minutos a 12000 rpm. Coloque una columna de filtro en un tubo de recolección y luego llénelo con sobrenadante. Centrifugar durante 1-2 minutos a 12000 rpm.

4. Transfiera el filtrado a una columna de adsorción y dejar reposar allí durante uno o dos minutos. Durante 0,5–1 minutos, centrifugue a 12000 rpm. Solo necesitas hacer este paso una vez.

5. Vacíe el tubo de recolección de residuos líquidos y agregue 500 µL de tampón de lavado a la columna de adsorción. 1 minuto de centrifugado a 12000 rpm. Solo necesitas hacer este paso una vez.

6. Retire el líquido de desecho del tubo de recolección y vuelva a insertar la columna de adsorción. Durante 0,5–1 minutos, centrifugue a 12000 rpm.

7. Retire la columna de adsorción y déjela secar durante un tiempo breve a temperatura ambiente (el tiempo varía según la estación, el clima y otros factores).

8. Coloque la columna de adsorción en un tubo de centrífuga nuevo y agregue de 50 a 100 µL del tampón de lavado precalentado a 65 °C. 1 minuto de centrifugado a 12000 rpm.

9. Después de agregar el líquido a la columna de adsorción en el paso 8, centrifúguelo durante 1 minuto a 12000 rpm. La solución de ADN microbiano para heces es el líquido en el tubo de centrífuga.

Notas:

1. • En primer lugar, las muestras de heces frescas ofrecerán un mayor rendimiento. Además, es importante hacer referencia a las circunstancias ideales de conservación para varias muestras.

   • Si la solución ha precipitado, caliéntela y disuélvala en un baño de agua a 37°C hasta que sea transparente; el resultado no se verá afectado.

1. • El precipitado no debe consumirse junto con el sobrenadante porque esto obstruirá la columna de adsorción y reducirá la calidad del producto.

   • El volumen de elución del Buffer no debe ser inferior a 50 µL; hacerlo reducirá la efectividad del proceso de recuperación. La elución con agua también provoca cierta pérdida de producto, por lo que se recomienda utilizar el tampón de elución incluido en el paquete. En caso de degradación, el producto de ADN debe conservarse a -20 °C y no debe congelarse y descongelarse repetidamente.

   • No tacar los reactivos en forma líquida, si se tocan accidentalmente, enjuague bien con agua.